Zusammenfassung

Der Prozess der Herstellung von mRNA-Impfstoffen basiert auf einer ordnungsgemäßen DNA-Verdauung nach einer In-vitro-Transkriptionsreaktion, um restliche kontaminierende DNA aus dem Plasmid-Backbone aus dem Prozess zu entfernen. Um die Qualität und Quantität potenzieller DNA-Verunreinigungen in mRNA-Impfstoffen zu bewerten, haben wir ungeöffnete, kühlkettenkonforme Impfstoffchargen aus zwei Pfizer- und drei Moderna-Fläschchen mit quantitativer PCR (qPCR), RNase A/Qubit-Fluorometrie und Oxford Nanopore-Sequenzierung auf restliche DNA-Kontamination untersucht. Wir verglichen Amplifikate der Spike-Region und Plasmid-Vektor-Amplifikate, um zwischen DNA-Verunreinigungen als doppelsträngige DNA (dsDNA) und RNA:DNA-Hybriden zu unterscheiden. qPCR-Assays ergaben eine mehr als 100-fache Diskrepanz in der Quantifizierung zwischen dsDNA und RNA:DNA-Hybriden, was mit einer ungleichmäßigen DNase-I-Verdauungseffizienz während der Herstellung von mRNA-Impfstoffen übereinstimmt. Tatsächlich führte die Behandlung von Impfstoffen mit DNase I-XT zu einer 100- bis 1000-fach höheren Degradation der Spike-DNA, insbesondere in Plasmidregionen, die RNA:DNA-Hybride bilden. Zusammen genommen deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass Rest-DNA-Tests, die sich auf einen einzigen qPCR für dsDNA stützen, Verunreinigungen nicht genau quantifizieren können und dass die Behandlung von Impfstoffpräparaten mit DNase I-XT während des Herstellungsprozesses die Qualität verbessern kann, indem sie die Kontamination durch RNA:DNA-Hybride reduziert. Zusammenfassung/Auswirkungserklärung: Aus den Zulassungsunterlagen geht hervor, dass Rest-DNA-Tests in der Regel auf einem einzigen qPCR-Assay basieren, der auf das Kanamycin (KAN)-Resistenzgen innerhalb des Plasmid-Backbones abzielt. Da sich dieser Bereich in einem DNase-empfindlichen Teil des Vektors befindet, unterschätzt ein solcher Test die Rest-DNA in Sequenzen, die RNA-hybridisiert und DNase I-resistent bleiben, einschließlich des Spike-Inserts.

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Kevin McKernan; Charles Rixey; Jessica Rose

Kevin McKernan: „Der Dead Man Switch wurde aufgehoben. Ich bin nicht tot, aber der Artikel wurde angenommen.
https://x.com/Kevin_McKernan/status/1996999166359126248?s=20

Es können weitere Änderungen auftreten, während das Journal den Text setzt, aber dieser Substack enthält die aktuellsten Versionen, Nostr-Links, Bitcoin-Links und Zenodo-Links.
https://anandamide.substack.com/p/rnadna-hybrids-survive-digestion

Warum das wichtig ist
Dieser Artikel zeigt, warum die Aufsichtsbehörden die DNA nicht finden können. Die Nukleasen, die zur Entfernung der DNA verwendet werden, können die RNA:DNA-Hybride nicht verdauen. Sie entfernen also das KAN-Gen, entfernen das Spike-Gen jedoch nicht und suchen nur nach dem KAN-Gen. Aus diesem Grund sieht die Fluorometrie ~100-mal mehr als qPCR.

Und noch einmal: Sie müssen uns nicht glauben. @CanningPharm hat Ihnen einen Artikel von BioNtech gezeigt, in dem dies dargelegt wird.

Sie wussten dies, wiesen die Regulierungsbehörden jedoch auf einen Test hin, der dies nicht finden würde.

Accepted Preprint

RNA:DNA hybrids survive digestion in mRNA vaccine manufacturing

2025